杨梅果肉维生素C含量测定法评价
杨梅作为我国南方著名的特色水果,口味好,风味独特,在果实品质研究中维生素C含量的测定是必不可少的。维生素C(简称Vc)又叫抗坏血酸,是一种已糖衍生物,包括还原型Vc和氧化型Vc两种,以前新鲜果晶中以测定还原型Vc为主。现有的Vc测定方法主要是全量测定法(测定还原型和氧化型Vc的总含量)如国标荧光法,2,4-二硝基苯肼法)和还原型Vc测定法(2,6-二氯靛酚滴定法、碘滴定法,钼蓝比色法、碘酸钾萃取分光光度法、原子吸收测定法、荧光法、色谱法等)两大类。有些方法既可测定全量,也可测定还原型Vc,如酶法,但目前这样的方法相对较少。尽管测定Vc方法很多,但在我国特色水果杨梅Vc的具体测定过程中,问题不少,还是没有简单满意的检测方法。下面就杨梅果肉VC测定过程中应用的几种测试方法简单作个评价。
1、靛酚淌定法
这是一种简单常用的方法,它利用还原型Vc还原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失;当还原型抗坏血酸全部被氧化时,过量的二氯靛酚钠盐呈现红色,指示终点。
1.12,6-二氯靛酚法(直接法)
常规首选的一种方法,查阅相关文献以前对杨梅Vc的研究,大多采用这种方法,但实际上由于杨梅本身紫红色,2,6-二氯靛酚法在实际测定中干扰大,终点色跟杨梅汁本身色泽很接近,难以获得满意结果,偏差很大,因此杨梅Vc含量分别检出值为约80mg/kg和430~630mg/kg。尽管在Vc测定的实验过程中采用过脱色剂,但结果均不尽人意。尤其应指出的是使用活性炭作脱色剂,不仅脱色效果不显著,而且一部分还原型Vc氧化为脱氢型Vc,经这样处理后的2,6-二氯靛酚法当然不能准确反映还原型Vc的含量。为此又尝试国标2,6-二氯靛酚乙醚萃取法,该法不尽操作很繁琐,批量检测很费时,且杨梅成熟期正值夏季高温季节,乙醚极易挥法,根本很难定量控制。
1.22,6-二氯靛酚反滴法(间接法)在直接滴定法不能满足杨梅Vc检测的状况下,采用间接反滴法,结果发现在对杨梅的测定中还是难获得满意结果,主要原因是这种方法是根据不同酸碱性染料显示不同颜色来判断终点的,而杨梅本身酸含量较高,且不同品种含酸量相差较大,直接影响终点判断,故亦难获满意结果。
2、碘滴定法(又称碘量法)
在常用染料法不成功的前提下,碘量法作为一种尝试法进行实验。碘量法的原理是还原型Vc还原碘,自身氧化成脱氢氧化型Vc,而碘由碘酸钾还原碘化钾得到,当多余碘存在时,淀粉呈蓝色,指示终点。尽管方法较简单,但在杨梅Vc测定中,由于果汁自身色泽及成分复杂,在终点指示时,不同品种结果不一,在实际测定过程中有些指示终点拖尾严重,结果偏差很大,重现鹾,测定结果Vc含量为200~400mg/kg之间。
3、比色法、光度法
根据报道,钼蓝比色法不易受样品提取液颜色的影响,即便是花青素含量高的山楂、草莓和黑加仑等果晶,也能准确测定其Vc含量。萃取法,如碘酸钾萃取分光光度法,也适于深色样品的测定。但具体应用在杨梅果肉维生素C测定中,还是由于其中色素干扰吸收值读数,且不同品种(如东魁品种跟黑炭梅)色素干扰不一,标准色泽跟样品背景色不同造成结果不理想。
4、2,4-二硝基苯肼法
这是脎比色法,单独讦价是因为目前它作为Vc测定的国标法之一,是一种全量测定法,它跟以前的苯肼法原理相近。首先将样品中的还原型V氧化为脱氢型V,然后与2,4-二硝基苯肼作用,生成红色的脎,将脎溶于硫酸后进行比色。最近国标中该法强调空白,每个样品及标准系列均需作对应空白,这样消除色泽、背景不一的误差。在实际杨梅汁Vc测定中,操作时间长,操作要求较严格,试剂较多,就一般实验室而言是目前可以采用的方法。
5、原子吸收间接测定法
这是最近报导的一种Vc测定法,其原理是在酸性介质中还原型Vc可将铜离子定量地还原为Cu+并与SCN-反应生成CuSCN沉淀,在高速离心机下有效地分离出沉淀,小心洗涤后再经浓硝酸溶解,用原子吸收法测定铜含量,即可推知样品中维生素C的含量。该法实验仪器较昂贵,主要问题是操作过程中反应完全与否,沉淀物洗涤、离心反复多次,极容易带来误差。该法优点是能不受果蔬自身颜色的干扰,有一定的发展前景。根据试验,发现此法结果偏低,还有待于进一步优化改善。
6、荧光法、色谱法
气相色谱法、液相色谱法和荧光法等方法虽然具有灵敏度高、选择性好等优点,但气相色谱仪、液相色谱仪和荧光分光光度计等仪器都比较精密昂贵,一般的常规实验室恐难具备。在一般的实验室果品分析中较难推广,且样品前处理纯化操作复杂,难普及推广。
上述几种Vc测定法在杨梅果肉的具体应用过程中,发现尽管方法不少,但实际值得推广的方法还有待探索,也有报导过氧化氢酶法,但杨梅汁带紫红色且成分较复杂,酸度大,在实际Vc测定过程中总是受色素干扰。值得一提的是还原型Vc不稳定,易氧化成氧化型Vc,因此,只有Vc全量才能较全面真实地反映果品的Vc含量水平。在研究果品品质时,应测定Vc全量,而不是仅测定还原型Vc,同时测试结果必注明测定方法。相比较而言,国标2,4-二硝基苯肼法可以作为目前杨梅果肉Vc测定相对可选择的方法之一,但快速、准确、灵敏度高、重现性和专一性好的杨梅果肉维生素C含量的测试方法仍需要继续探索和发现。